Die Rolle des NF-B-Signalwegs bei der Aktivierung muriner Makrophagen durch das N-terminale Fragment des kardialen Myosin-bindenden Proteins C (C0C1f)
Jenine Hang-Ni NGUYEN
Die Aufklärung der grundlegenden Mechanismen bei kardiovaskulären Erkrankungen ist essenziell für die Entwicklung neuer Therapieansätze und Medikamente, um das Fortschreiten von Myokardschäden zu verhindern. Besonders die Inflammation nach Myokardinfarkt führt oftmals zu einer überschießenden Immunantwort, die in einem größeren Gewebsschaden als ursprünglich verursacht mündet. Ziel dieser Arbeit war es, die molekularen Zusammenhänge des cMyBP-C und der inflammatorischen Prozesse in Makrophagen aufzudecken. Um diese Mechanismen in Erfahrung zu bringen, wurden in vitro Zellkulturexperimente unter Verwendung von murinen Makrophagen herangezogen. Nach der Isolation muriner Knochenmarksstammzellen wurden diese mithilfe von M-CSF zu Makrophagen ausdifferenziert und dienten als Modell für Makrophagen des gesunden Körpers. Die Zellen wurden für Verfahren wie Western Blot, qRT-PCR, Immunhistochemie und den EMSA-ELISA Test untersucht. Das cMyBP-C ist Bestandteil des dicken Filaments im Sarkomer und gewährleistet die Interaktion zwischen Aktin und Myosin zur Kontraktion des Muskels. Unter einem Myokardinfarkt kommt es zur Spaltung des cMyBP-C. Dabei entsteht ein Teilfragment, das C0C1f. Durch Stimulation der Makrophagen mit C0C1f über verschiedene Zeiträume konnte gezeigt werden, dass konzentrationsabhängig eine proinflammatorische Antwort, auf mRNA und teilweise auch auf Proteinebene, über IL-6, IL-1, TNF, ICAM-1, VCAM-1 und MCP-1 in Makrophagen ausgelöst wurde. Weiterhin konnte über die Inhibierung von NF-kB unter Verwendung des Inhibitors Bay 11-7082 verdeutlicht werden, dass die aktivierte Signalkaskade über den Mediator NF-κB läuft. Es zeigte sich ebenfalls ein Zusammenhang zwischen der durch C0C1f ausgelösten Inflammationsantwort und den Rezeptoren TLR 2, TLR 4 und RAGE. Die Ergebnisse dieser Arbeit liefern einen erweiterten Einblick in die intrazellulären Mechanismen in primär murinen Makrophagen nach C0C1f Stimulation. Bei bisher bekannten eher negativen Auswirkungen des C0C1f auf Kardiomyozyten könnte eine Verhinderung der cMyBP-C-Spaltung und Inhibierung der C0C1f-Stimulation als therapeutischer Ansatz in Frage kommen. Weiterhin gilt zu eruieren, inwieweit die Ergebnisse auch in vivo auf den menschlichen Organismus übertragbar sind, um einen möglichen therapeutischen Nutzen zu verdeutlichen.
